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花叶毛白杨叶片致黄花叶形成因子


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【摘要】:   花叶毛白杨叶片致黄花叶形成因子   为了探索花叶毛白杨的花叶形成因子,以花叶毛白杨为研究材料,采用接种鉴定、ELISA测定法、病毒Yal.奄硅=RNA检测7LRT-PCR检测4种方法对花叶毛白杨的致黄因子进行病毒学鉴定。结果表明:(1)花叶毛白杨花叶样品过滤液经对指示植物烟草(Nicotiana tabactLra)、大豆(Glycinemax)及北京杨幼苗(Populus beifingensis)摩擦接种或注射接种后,未出现皱折、局部失绿等症状;(2)花叶毛白杨花叶样品过滤液选用24种抗血清进行酶联免疫检测,均未得到阳性结果;(3)花叶毛白杨花 [更多详细]

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【正文】:

   花叶毛白杨叶片致黄花叶形成因子

   为了探索花叶毛白杨的花叶形成因子,以花叶毛白杨为研究材料,采用接种鉴定、ELISA测定法、病毒Yal.奄硅=RNA检测7LRT-PCR检测4种方法对花叶毛白杨的致黄因子进行病毒学鉴定。结果表明:(1)花叶毛白杨花叶样品过滤液经对指示植物烟草(Nicotiana tabactLra)、大豆(Glycinemax)及北京杨幼苗(Populus beifingensis)摩擦接种或注射接种后,未出现皱折、局部失绿等症状;(2)花叶毛白杨花叶样品过滤液选用24种抗血清进行酶联免疫检测,均未得到阳性结果;(3)花叶毛白杨花叶样品dsRNA电泳图未出现明亮条带;(4)RT-PCR未得到扩增产物。花叶毛白杨的叶片致黄因子不是由植物病毒引起。


     毛白杨(Populus tomentosa CalT.)是中国北方特有的乡土树种之一,具有速生、抗性强,材质优良等特点,倍受人们喜爱,在中国北方广为栽培。杨树花叶病毒病(PopMV)是1种世界性病害,中国于1972年从意大利引进杨树插条使之传入,现已在中国天津、山东、河南、湖南、陕西、甘肃、宁夏等省区发生,常造成树木生长不良。此病于1979年在北京首次被向玉英等口1发现,并对其进行了生物学鉴定及抗病品种的研究,向玉英还报道2种引起杨树花叶病的病毒(CMV、删)p1,鲁瑞芳等C41对哈尔滨表现斑驳花叶症状的杨树叶片进行血清学和生物学鉴定,证明是由黄瓜花叶病毒(CMV)引起。植物花叶病毒能够通过接种传染而表现,TMV(Tobacco Mosaic Virus)主要通过机械摩擦传染,还可通过嫁接传播,但不通过种子,昆虫及其他介体传播。酶联免疫吸附分析测定法(ELISA)由于具


  有高灵敏度、快速、应用范围广、特异性强、价格低廉、试剂用量少、并可以较长时间保存等特点,已被植物病毒学家广泛应用于植物病毒的检测,病毒病的普查,口岸和产地检疫等方面,已经成为许多国家大规模监控植物病毒病的常规方法【91。dsRNA及RT-PCR具有与ELISA相同优点,已用于多种植物病毒的诊断和检
测m控l。花叶毛白杨(Populus tomentosa‘Huaye’)是笔者于2003年在三倍体毛白杨快速繁殖中发现的变异植株,特点是叶片在整个生长季节为金黄色或黄绿相间,具有较高的观赏价值。据报道,花叶病毒及基因突变是植物叶片变黄、变花的主要因素”21。关于花叶毛白杨叶片致黄因子的研究未见公开报道。因此,本研究
拟通过不同的鉴定方法(柯赫法则接种鉴定、酶联免疫吸附测定法(ELISA)、提取dsRNA及RT-PCR检测)探索导致花叶毛白杨叶片变黄的原因,对于开展花叶毛白杨基因突变育种及病害预防有重要意义。
1材料与方法
1.1试验时间、地点
花叶毛白杨叶片特征观测研究于2003年5月一2008年6月在北京农业职业学院实训中心试验基地进行;室内试验于2007年6月_2008年6月在中国林业科学研究院森林生态环境与保护研究所、国家林业局森林生态保护重点试验室进行。
1.2试验材料
2007年6月采集花叶毛白杨花叶叶片,置于密封袋中冷藏备用。
1.3试验方法
1.3.1指示植物接种试验取花叶毛白杨花叶叶片20 g,置于研钵中,加入适量液氮,快速研成粉末状,再加入适量磷酸盐缓冲液,搅拌成糊状,低速离心去渣,用清洁纱布蘸取叶片过滤液,在4种对杨树花叶病毒敏感的指示植物(克利夫兰烟、三生烟、东北三号大豆、北京杨幼苗)叶片上摩擦接种,或用一次性注射器注射到指示植物叶片上。将健康指示植和接种黄瓜花叶病毒(CMV)的指示植物作为对照。接种后的指示植物置于室温25℃的组培室,每天观察并记录描述其接种后的表现。7~10天后,如果指示植物出现皱折、局部失绿等症状,说明指示植物已被病毒感染,表明花叶毛白杨的花叶是由病毒引起。


   酶联免疫吸附测定法(ELlSA)是一种对植物病毒进行有效检测和鉴定的常用方法。笔者选用24种抗血清对花叶毛白杨花叶样品进行酶联免疫检测分析。24种抗血清是目前国内较为常见植物病毒的抗血清,其中包括已经报道的能够侵染杨树的烟草花叶病毒(TMV)和黄瓜花叶病毒(cMv)的抗血清。酶联免疫检测分析结果显示,IPA值均小于3,其中TMV和CMV测定值分别为0 98和099,均末得到阳性结果。结果表明,花叶毛白杨的花叶症状不是由这24种植物病毒导致。



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